深圳市恒昊生物科技有限公司

流行性脑膜炎（ECM）A 群 IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使 用 说 明(96T)

[原理]

本试剂盒采用亲和素-生物素化 ECM-A 纯化抗原预包被板 ELISA 原理，检测人血清/血浆中存在的流脑 A 群 IgG 抗体，并配以酶标记抗人 IgG 单克隆抗体作为标记物。加入底物 TMB 显色后终止反应，在450nm 波长测各孔 O.D 值，O.D 值的大小与待检抗体含量成正比。生物素系统（biotin-avidin system）的稳固级联放大作用，使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高。

[用途]

本试剂盒用于定性检测人血清/血浆、脑积液中的脑膜炎球菌 A 群 IgG 型抗体，适用于流脑 A 群既往感染的诊断和流行病学调查及疫苗效果监测。

[适应范围]

流脑感染的流行病学调查及疫苗监测；流脑多在冬春季节发病，儿童多见。

[试剂盒组成]

1、生物素化 ECM-A 抗原预包被板 1 块（8X12）

2、阴性对照 1 瓶（直接使用）

3、阳性对照 1 瓶（直接使用）

4、标本稀释液 1 瓶（直接使用）

5、酶结合物 1 瓶（直接使用）

6、30X 浓缩洗液

1 瓶（20ml，加蒸馏水 1：30 稀释使用）

7、显示剂 A、B 液 各 1 瓶（5ml）

8、终止液（2M H2SO4） 1 瓶（5ml）

9、说明书 1 份

[操作步骤]

1、试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后置于板架上。

2、样本稀释：用标本稀释液以 1：4（25ul 血清加入75ul 的标本稀释液）稀释血清标本于反应板孔中，设阴、阳性对照（各 100ul）及空白对照（加 100ul标本稀释液）各一孔，轻拍混匀。

3、37℃温育 30 分钟。甩去孔内液体，用洗涤液洗板3 次并在吸水纸上拍干。

4、加酶结合物：每孔 2 滴，混匀后置 37℃温育 30 分钟。同上法洗涤 3 次并拍干。

5、显色：每孔加显色剂 A、B 各一滴，轻拍混匀（或震荡器混匀）后置 37℃10 分钟。

[结果判断]

1．目测：在白色背景下观察各孔显色情况，兰色者为阳性，无色者为阴性。

2．酶标仪测定：每孔加终止液一滴，混匀后在 450nm下测定各孔 O.D 值。1 P/N=标本 O.D 值/阴性对照 O.D 值。2 P/N≥2.1 为阳性；

3 P/N＜2.1 为阴性

4 阴性对照(NC)小于 0.10 时以 0.10 计算, 大于 0.1 小于 0.21 时以实际 O.D 值计算 ;若大于0.21时,实验可能出现了较大误差,需重复实验。

5 阳性对照（PC）值通常≥0.4,实验成立,否则需重做。

[注意事项]

1、微孔板须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用，余者封存置2-8℃。

2、滴加试剂前应将液体翻转数次混匀，滴加时保持瓶身垂直。

3、洗涤时每孔均须加满，防止孔内有游离酶不能洗净。

4、试剂置 2-8℃存放，不能冻结，有效期 10 个月。

5、避免用溶血、混浊或脂血标本。

6、最好用新鲜标本，如需保存，可于 2-8℃冷藏 48小时或-20℃冻存 4 周（样本应避光）。